沉淀蛋白质的主要方法有哪些?各有何特点?(章节:第五章 难度:4)
正确答案:沉淀蛋白质的主要方法有:盐析、有机溶剂沉淀、重金属盐沉淀、生物碱试剂沉淀。盐析特点:利用中性盐破坏蛋白质的胶体稳定性(电荷和水化膜)而使其从溶液中析出。蛋白质不变性。不同蛋白质盐析时所需盐的浓度不同,故可用逐渐加大盐浓度的办法使溶液中混合的蛋白质先后分离不发生变性(分段盐析)。有机溶剂沉淀的特点:与水亲和性强,破坏蛋白质表面的水化膜,但不能中和电荷,因此需在等电点附近沉淀蛋白质,且在低温下进行以防止蛋白质变性。重金属盐沉淀的特点:调节溶液pH大于蛋白质的等电点,蛋白质带负电,与重金属结合而沉淀,一般使蛋白质变性。生物碱试剂沉淀特点:调节溶液pH小于蛋白质的等电点,蛋白质带正电,与某些酸的酸根结合而沉淀,一般使蛋白质变性。
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