简述三点校正法(UV法)测定维生素A的原理及波长选择原则。
正确答案:主要原理:①供试品中干扰物质(有关物质及稀释用油)的吸收在310~340nm的波长范围内呈线性,即在维生素A最大吸收波长附近,干扰物质的吸收几乎呈一条直线。②物质对光的吸收具有加和性,即在供试品溶液的吸收曲线上,各波长处的吸光度是维生素A的吸收与无关吸收的加和值,吸收曲线也是两者吸收曲线的叠加。
波长选择原则:三点波长的选择原则为一点选择在维生素A的最大吸收波长处(即λ);其他两点选择在λ的两侧各选一点(λ和λ)。①第一法(等波长差法):使λ-λ=λ-λ。测定维生素A醋酸酯时,λ=328nm,λ=316nm,λ=340nm,△A=12nm。②第二法(等吸收比法、等吸收度法、等吸收差法):使A=A=6/7A,测定维生素A醇时,λ=325nm,λ=310nm,λ=334nm。
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