乳酸脱氢酶的顺向反应和逆向反应各有什么优点?
正确答案:以乳酸为底物的反应称为顺向反应,以丙酮酸为底物的反应称为逆向反应。顺向反应的优点是:
(1)此法所需的氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)较逆向反应需用的还原性辅酶Ⅰ(NADH)稳定,易得纯品,含抑制LDH的杂质少,价格也较低;
(2)乳酸钠(或乳酸锂)底物比丙酮酸底物稳定;
(3)过量乳酸对LDH的抑制低于过量丙酮酸对LDH的抑制。
逆向反应的优点:
(1)NADH用量少,只是正向反应所用NAD+的3%;
(2)酶反应速率也比乳酸盐法快,单位时间内吸光度的变化较大,能使用比较少的样品在较短的时间内进行测定;
(3)酶活力随时间的线性关系较长;
(4)用NADH或丙酮酸盐启动反应,其反应速度相同,而由乳酸盐到丙酮酸盐的反应中,LDH活力取决于使用的启动剂。
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