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SANGER双脱氧链终止法测定DNA序列的原理 ( 难度:4 )

正确答案:在DNA合成时,利用DDNTP与DNTP竞争掺入到新生的DNA链上,致链延伸反应终止。在模板指导和测序引物引导下,按碱基配对原则,聚合酶不断将DNTPs加到引物的3’-OH末端,使引物延长,合成出新的互补的DNA链。如果加入DDNTPs,由于双脱氧核糖的3’位置上缺少一个OH,故不能与后续的DNTP形成磷酸二酯键,最后每个反应体系中可合成一系列具有相同的5′端和不同3′端的引物延伸链的长短不一的混合物。各反应体系的系列产物的3’末端分别是其相应的核苷酸。通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(可区分一个核苷酸之差)分离和放射自显影检测后,从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列,由此推知待测模板链的序列。
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