如何提高PCR扩增的特异性? ( 难度:4 )
正确答案:① 升高退火温度可增加引物与模板结合的特异性;② 缩短退火和延伸时间,可减少错误引发及多余的DNA聚合酶分子参与酶促延伸的机会;③降低引物和酶的浓度也可以减少错误引发,尤其是能减少引物二聚体的引发;④ 改变MG2+的浓度可进一步提高扩增的特异性;⑤ 引物设计的特异性;⑥ 减少循环次数;⑦ 热启动(Hot StArt)。即首先将模板变性,然后在较高温度时加入TAq DNA聚合酶、引物及MGCl2等一些重要成分,这样使得引物在较高温度下与模板退火,提高了反应的严谨性,使扩增更特异;⑧ 采用二对引物即外引物和内引物进行扩增来提高扩增的特异性。
答案解析:有
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